Inhoud
- Verdunnen van monsters, platering en incubatie
- Handmatig tellen
- Geautomatiseerd tellen
- Het tellen ingewikkelder maken
Een van de klassieke manieren om de concentratie microben in een monster te bepalen, is het monster te verdunnen, de microben op platen te laten groeien en de kolonies te tellen. De geplateerde microben groeien van een kolonie-vormende eenheid bestaande uit een of meer cellen tot een zichtbare kolonie die kan worden gezien en geteld. Bacteriën zijn de meest voorkomende microbe om te beoordelen met behulp van plaattellingen. Kolonietellingen worden gebruikt om microben in grond, water en voedsel te detecteren en te tellen. Protocollen voor het tellen van kolonies benadrukken een nauwkeurige en methodische aanpak.
Verdunnen van monsters, platering en incubatie
Als je gewoon een microbe-monster op een agarplaat smeert, zie je zoveel kolonievormende eenheden dat de afzonderlijke kolonies samengaan, waardoor ze onmogelijk te tellen zijn. Om dit probleem op te lossen, meng je het monster in een vloeibaar medium, neem je een kleine hoeveelheid van dat mengsel en verdun je het verder. Herhaal dit proces zes tot tien keer. Spreid de laatste verdunning uit op een agarplaat en incubeer deze vier tot zeven dagen voordat u de kolonies telt.
Handmatig tellen
De primaire truc bij het tellen van kolonies is om elke koloniepunt eenmaal te tellen. Een benadering is om de petrischaal op een rasterachtergrond te plaatsen en de kolonies in elke rastercel te tellen, in een methodisch patroon door alle cellen. Het markeren van getelde kolonies op de achterkant van de petrischaal kan ook een nuttige benadering zijn. Over het algemeen moet u minstens drie platen tellen; gebruik alleen platen met 30 tot 300 kolonies om krachtige conclusies te trekken, suggereert het Microbiology Network, een bedrijf dat adviesdiensten verleent aan laboratoria en fabrikanten. Platen met kolonies die te veel zijn om te tellen of met te weinig kolonies moeten opnieuw worden uitgeplaat uit een nieuwe verdunning.
Geautomatiseerd tellen
Menselijke fouten dragen bij aan de tijd die nodig is om kolonies handmatig te tellen. Plaats de petrischaal in een geautomatiseerd kolonietelapparaat om zowel de nauwkeurigheid als de efficiëntie te verbeteren. Geautomatiseerde kolonietellers maken een afbeelding van de schaal, scheiden de kolonies van de achtergrond en gebruiken vervolgens een algoritme om de kolonies op de plaat te tellen. De algoritmen kunnen moeilijkheden hebben om kolonies te onderscheiden wanneer twee of meer kolonies elkaar raken aan de randen, dus dit is een gebied van voortdurende softwareontwikkeling.
Het tellen ingewikkelder maken
De nauwkeurigheid van het berekenen van de dichtheid van microben uit kolonietellingen heeft wel enkele beperkingen. Kolonie-vormende eenheden kunnen een enkele cel, een reeks cellen of een hele groep cellen zijn. De veronderstelling is dat een kolonie één cel vertegenwoordigt, dus de concentraties die zijn berekend uit kolonietellingen kunnen laag zijn. Verschillende microben hebben verschillende groeiomstandigheden nodig, en de kolonies op de plaat vertegenwoordigen alleen die microben die op die groeimedia onder die incubatieomstandigheden gedijen. Kolonietelling registreert bovendien geen dode cellen, een belangrijke overweging wanneer u de concentratie cellen in het oorspronkelijke monster nodig hebt.