Inhoud
Een spectrofotometer wordt gebruikt om de concentratie van bepaalde verbindingen, zoals eiwitten, in een oplossing te bepalen. Over het algemeen schijnt een licht door een kuvet gevuld met een monster. De hoeveelheid licht die wordt geabsorbeerd door het monster wordt gemeten. Omdat verbindingen licht absorberen in verschillende spectrale bereiken, moet de juiste golflengte worden ingesteld voor de analyse. Er zijn talloze manieren om de concentratie van onbekende monsters te berekenen via spectrofotometrie, maar het gebruik van referentiestandaarden geeft de beste nauwkeurigheid. Bovendien geven standaarden ook aan of de spectrofotometer niet goed werkt of andere problemen met de analyse hebben.
Berekenen via rechte lijnvergelijkingen
Analyseer referentiestandaarden aan het begin van de analyse. Normen zijn bekende concentraties en worden gebruikt om apparatuur te kalibreren en de nauwkeurigheid te controleren. Alle monsters moeten binnen het werkbereik van de normen vallen. Zo niet, dan moeten monsters worden verdund of moet de concentratie van normen worden verhoogd.
Maak een spreidingsdiagram of lijngrafiek met standaardconcentratie- en absorptiewaarden. De concentratie zal op de y-as liggen, het absorptievermogen op de x-as. De normen zijn bijvoorbeeld 1 ppm, 2,5 ppm en 5 ppm. Het gegeven absorptievermogen was 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5 en 5 ppm = .75.
Maak de trendlijn op om een vergelijking in de grafiek weer te geven. De vergelijking toont de formule y = mx + b. Met behulp van de normen in stap 2 is de vergelijking bijvoorbeeld y = .1224x + 0,1531. De meeste trendlijnen worden op nul onderschept, maar dit hangt af van de analysemethode en de R-kwadraatwaarde.
Analyseer onbekende monsters en neem absorptiewaarden op.
Gebruik de vergelijking (y = mx + b) om de concentratie van monsters te bepalen.
Rechte lijnvergelijking begrijpen
Laat "Y" gelijk zijn aan de concentratie. Dit zal worden opgelost.
Laat "X" gelijk zijn aan het absorptievermogen van het monster. Dit is het absorptievermogen gemeten door de spectrofotometer.
Laat "" gelijk aan de helling en "b" gelijk aan het y-onderscheppen. Beide worden gegeven, maar als de trendlijn door 0 werd geforceerd, wordt "b" 0.
Oplossen voor concentratie. Gebruik het voorbeeld in stap 3 en vervang "x" als een gegeven absorptievermogen van 0,563. daarom:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (concentratie) = .222011