Inhoud
Wetenschappers gebruiken seriële verdunningen (een reeks van 1:10 verdunningen) om de populatiedichtheid van bacterieculturen te berekenen. Wanneer een druppel cultuur met een klein aantal bacteriën wordt uitgeplaat en geïncubeerd, zal elke cel theoretisch ver genoeg verwijderd zijn van andere cellen om een eigen kolonie te vormen. (In werkelijkheid kunnen sommige kolonies afstammen van twee nabijgelegen cellen, maar dit is zeldzaam in verdunde culturen, en dus is het aantal kolonies een zeer goede schatting van het aantal cellen dat oorspronkelijk naar de plaat is overgebracht.) Omdat de populatiedichtheid onbekend, er moeten verschillende verdunningen worden gebruikt om te eindigen met één plaat met een geschikt aantal kolonies.
Seriële verdunningen
Label de zes reageerbuizen (elk met 9 ml groeimedia) als 1 tot 6. Label de zes agarplaten als 1 tot 6. Gebruik een pipet en steriele 1 milliliter (ml) pipettips om 1 ml bacteriekweek in buis over te brengen 1.
Meng goed en breng 1 ml van buis 1 over in buis 2 met behulp van een pipet en steriele tips van 1 ml.
Herhaal stap 2 voor de resterende buizen, waarbij telkens 1 ml van de meest recent gebruikte buis naar de volgende buis wordt overgebracht.
Gebruik een pipet en steriele tips van 0,1 ml om 0,1 ml van buis 1 naar een agarplaat over te brengen. Steek een L-vormige glazen staaf in vlammen en gebruik deze om de druppel gelijkmatig over de plaat te verspreiden. Incubeer de plaat gedurende 48 uur bij een geschikte temperatuur voor de gebruikte bacteriën. Verschillende soorten bacteriën hebben verschillende optimale groeitemperaturen. Als u de optimale groeitemperatuur niet kunt vinden met referentiemateriaal, probeer dan de platen te incuberen bij 25 en 37 graden.
Herhaal stap 4, waarbij u telkens vloeistof uit een andere reageerbuis op de bijbehorende plaat overbrengt.
Populatie Berekeningen
Bekijk de zes platen en kies degene met 30 tot 200 geïsoleerde kolonies.
Vermenigvuldig het aantal kolonies op de plaat met 10 om het aantal cellen per ml kweek uit de gebruikte verdunningsbuis te berekenen.
Vermenigvuldig het aantal van stap 2 met 10 ^ (plaatnummer) om het aantal cellen per ml oorspronkelijke kweek te berekenen. De waarde van 10 ^ (plaatnummer) is de verdunningsfactor van de kweek die wordt gebruikt om die plaat te onschadelijk maken.