Inhoud
Spectrofotometrie is een hulpmiddel van onschatbare waarde in chemie en biologie. Het basisidee is eenvoudig: verschillende stoffen absorberen licht / elektromagnetische straling beter op sommige golflengten dan op andere. Daarom zijn sommige materialen transparant, terwijl andere bijvoorbeeld gekleurd zijn. Wanneer u licht van een bepaalde golflengte door een oplossing laat schijnen, hoe hoger de concentratie, hoe meer licht het zal absorberen. Om de concentratie te berekenen, moet u uw meetwaarde vergelijken met meetwaarden voor normen met een bekende concentratie. De onderstaande procedure is een vrij generieke procedure die is geschreven met het chemieleerlaboratorium in gedachten, maar kan ook worden aangepast voor andere instellingen.
Zoals altijd tijdens het werken in een laboratorium, doe je bril, handschoenen en jas met lange mouwen aan om je eigen veiligheid te garanderen.
Knijp in de rubberen lamp om lucht te legen en plaats deze bovenop uw afgestudeerde pipet en laat de lamp ontspannen zodat deze water in de pipet zuigt. Verwijder vervolgens de lamp en sluit de bovenkant van de pipet met uw vinger; hierdoor wordt de pipet afgesloten zodat de binnenste oplossing niet wegloopt totdat uw vinger is verwijderd. Til de rand van uw vinger iets op om een beetje oplossing uit de pipet te laten stromen, totdat u het gewenste volume bereikt. Oefen met wat water en een beker om een idee te krijgen hoe de afgestudeerde pipet werkt. De link onder het gedeelte Bronnen bevat een filmpje om te laten zien hoe u een pipet kunt gebruiken voor het geval u er nog nooit eerder mee hebt gewerkt.
Label 5 reageerbuizen als normen 1-5. U kunt ze labelen met afplakband en een pen of met een marker voor droog wissen.
Kies vijf concentraties voor uw normen. U wilt dat de standaardconcentraties van elkaar worden gescheiden met ongeveer hetzelfde interval - bijvoorbeeld 0,1 molair, 0,2 molair, 0,3 molair, enz. - en in ongeveer hetzelfde bereik als wat u verwacht dat uw onbekende zal zijn. Gebruik voorlopig de volgende vijf concentraties, maar onthoud dat u deze moet aanpassen wanneer u uw eigen experiment uitvoert:
Standaard 1: 0,1 mol Standaard 2: 0,2 mol Standaard 3: 0,3 mol Standaard 4: 0,4 mol Standaard 5: 0,5 mol
Neem vervolgens de 1 molaire standaardoplossing en voeg de volgende hoeveelheden toe aan reageerbuizen 1-5. Vergeet niet dat deze hoeveelheden worden berekend met behulp van de hierboven vermelde concentraties, dus u moet ze mogelijk aanpassen als u uw eigen experiment uitvoert.
Standaard 1: 0,8 ml Standaard 2: 1,6 ml Standaard 3: 2,4 ml Standaard 4: 3,2 ml Standaard 5: 4 ml
Spoel de maatpipet af en breng vervolgens de volgende hoeveelheden gedeïoniseerd water over:
Standaard 1: 7,2 milliliter Standaard 2: 6,4 milliliter Standaard 3: 5,6 milliliter Standaard 4: 4,8 milliliter Standaard 5: 4,0 milliliter
Kortom, het idee is om de hoeveelheid oplossing in elke buis tot 8 milliliter te brengen.
Sluit elk van de standaardbuizen af met parafilm en keer ze om om te mengen.
Markeer nog vijf reageerbuizen als "Onbekend 1-5." Voeg dezelfde hoeveelheden van uw onbekende of testoplossing toe aan elke hoeveelheid die u gebruikte met de 1 molaire oplossing voor de normen. Met andere woorden, onbekend 1 bevat 0,8 ml testoplossing en 7,2 ml water, onbekend 2 bevat 1,6 ml testoplossing en 6,4 ml water, enzovoort.
Cap elk van de onbekenden met parafilm, en keer voorzichtig om om te mengen.
Schakel de spectrofotometer in en laat deze opwarmen. De benodigde tijd hangt af van het model en de fabrikant.
Stel de golflengte in op de spectrofotometer. De golflengte is afhankelijk van het type chemische stof in uw experiment. Ga voor nu uit van 500 nm, maar onthoud dat je dit voor verschillende experimenten moet veranderen.
Kalibreer uw spectrofotometer. De kalibratieprocedure is afhankelijk van het apparaat dat u gebruikt. Voor de Spectronic 20, een gebruikelijk model in onderwijslaboratoria, moet u de machine eerst aanpassen zodat deze "0 procent T" aangeeft wanneer er geen cuvette is geladen, en vervolgens aanpassen zodat "100% T" wordt weergegeven als een lege cuvette met gedeioniseerd alleen water wordt geladen. Deze procedures kunnen variëren, afhankelijk van het type machine dat u gebruikt, dus raadpleeg de instructies van de fabrikant voor details.
Nadat de machine is gekalibreerd, neemt u de standaard 1 reageerbuis en giet de inhoud in een schone cuvette totdat ze de vullijn bereiken. Veeg de cuvette af met een kimwipe om vingers of ander vuil te verwijderen. Plaats de cuvette in de spectrofotometer en noteer de "% T" -waarde.
Herhaal deze procedure voor alle 10 monsters. WEES ZEKER om de cuvette tussen de monsters schoon te maken om ervoor te zorgen dat uw resultaten zo nauwkeurig mogelijk zijn.
Neem de resultaten voor uw normen en voer ze in een spreadsheet / grafisch programma zoals Excel of OpenOffice in.
Gebruik het spreadsheetprogramma om 100% te delen door elk van de "% T" -waarden voor de standaarden en neem vervolgens het logboek van het resultaat. Deze berekening geeft u de absorptie. Als u de formule invoert, zal uw spreadsheetprogramma de berekening voor u uitvoeren.
Voorbeeld: als% T 50,6 is, ziet de formule die u in het spreadsheetprogramma invoert er als volgt uit:
logboek (100 / 50.6)
Het spreadsheet-programma doet het rekenwerk.
Doe hetzelfde voor alle vijf onbekende / experimentele waarden.
Breng de absorptiewaarden in kaart voor alle vijf standaarden, met concentratie op de x-as en absorptie op de y-as. Pas met behulp van het spreadsheetprogramma een lineaire vergelijking aan deze grafiek toe. De vergelijking heeft de vorm y = mx + b. De meeste spreadsheetprogramma's hebben een lineaire regressiefunctie. Raadpleeg de gebruikershandleiding van uw spreadsheetprogramma voor meer informatie over het gebruik van de lineaire regressiefunctie.
Neem de vergelijking voor de best passende lijn uit uw spreadsheetprogramma en los deze op voor y door b van beide kanten af te trekken en beide kanten te delen door m. Het resultaat ziet er als volgt uit:
(y - b) / m = x
waarbij b en m waarden zijn die door uw spreadsheetprogramma zijn gevonden.
Controleer uw absorptiewaarden voor het onbekende en kies er drie die ongeveer in hetzelfde bereik vallen als de normen. Gebruik deze drie absorptiewaarden voor uw resterende berekeningen. Als alle vijf binnen hetzelfde bereik vallen als de normen, kunt u in plaats daarvan alle vijf gebruiken, maar u moet er minstens drie gebruiken.
Steek elk van de drie absorptiewaarden in uw vergelijking in plaats van y. Vergeet niet dat uw vergelijking de volgende vorm had:
(y - b) / m = x
Dus wil je de absorptiewaarde voor elke onbekende in de vergelijking stoppen in plaats van y en vervolgens x berekenen. U kunt het spreadsheetprogramma gebruiken om deze berekening voor u te maken en het sneller te maken. U hebt nu de concentratie van de chemische stof van interesse berekend in drie van uw verdunde onbekenden. De oorspronkelijke oplossing werd verdund om deze onbekende factoren te bereiden, dus u moet nu achteruit werken en de concentratie van de oorspronkelijke oplossing berekenen op basis van de verdunningsfactor.
Elk onbekend monster dat u in de spectrofotometer hebt ingebracht, werd met een andere hoeveelheid verdund. Daarom moet u de berekende concentratie nu op basis van de absorptie voor elke onbekende meting door het volgende delen:
Onbekend 1: Delen door 0.1 Onbekend 2: Delen door 0.2 Onbekend 3: Delen door 0.3 Onbekend 4: Delen door 0.4 Onbekend 5: Delen door 0.5
Onthoud echter dat deze cijfers zijn gebaseerd op de veronderstelling dat u de hierboven beschreven verdunningen gebruikt. Vergeet niet om deze waarden te wijzigen als u uw monsters met een andere hoeveelheid hebt verdund.
Voeg uw resultaten bij elkaar en deel ze door het aantal resultaten. Dit geeft je een gemiddelde. Rapporteer dit nummer als uw bevinding voor de concentratie van de oorspronkelijke oplossing.