Een enzym is een eiwit dat chemische reacties katalyseert (verhoogt de snelheid van). De optimale temperatuur van de meeste enzymen, of de temperatuur waarbij enzymen reacties het beste faciliteren, ligt tussen de 35 en 40 graden Celsius. Verhoging van de temperatuur in dit venster verhoogt de reactiesnelheid, omdat het moleculen exciteert en de snelheid verhoogt waarmee enzymen / reactanten botsen en reageren om een product te maken. Een te hoge temperatuur kan het enzym echter denatureren en verhinderen dat het werkt.
Bepaal de optimale enzymtemperatuur door de reactie te verwarmen met oneindige hoeveelheden en kleine monsters van de reactie te nemen om te bepalen wanneer de maximale snelheid van het produceren van product optreedt.
Selecteer een methode. Bepaal hoe u de concentratie van uw product op verschillende punten in het experiment gaat meten. U kunt bijvoorbeeld de concentratie van veel producten meten met behulp van een spectrofotometer en de concentratie berekenen op basis van de absorptie, of door de fluorescentie te meten en de concentratie te berekenen op basis van fluorescentie.
Zet je experiment op. Plaats uw reactanten en enzym in een kleine container met een deksel, zoals een scintillatieflesje. Reactie zal beginnen. Plaats de scintillatieflacon in een grotere beker water op kamertemperatuur. Plaats het bekerglas op een verwarmingsplaat. Plaats een thermometer in de beker. Hiermee kunt u de temperatuur van de reactie op verschillende punten meten.
Neem een monster van 100 microliter van de reactie bij kamertemperatuur, ongeveer 25 graden Celsius. Schakel de verwarmingsplaat in. Neem bij verschillende temperaturen tussen 30 en 40 graden Celsius (30,5, 31, 31,5, enz.) Monsters van 100 microliter van uw reactie.
Bepaal de concentratie van uw product bij elke temperatuur. Wanneer de temperatuur boven 40 graden Celsius stijgt, ziet u een afname van de snelheid waarmee substraat wordt omgezet in product, omdat het enzym wordt gedenatureerd. Het punt waarop het product met de maximale snelheid wordt geproduceerd, is het punt waarop de temperatuur optimaal is.