Inhoud
Het isoleren van bacteriën uit de bodem is een belangrijke eerste stap in veel microbiologische experimenten. Als ze eenmaal zijn geïsoleerd, kunnen bacteriën verder worden geanalyseerd om dingen te bepalen, zoals hun soort en hun functie in het bodemmilieu. Zelfs een kleine hoeveelheid grond kan miljoenen bacteriën bevatten, waardoor het noodzakelijk is om een grondmonster te verdunnen voordat bacteriën uit het monster worden geïsoleerd.
Meet 100 ml. gedestilleerd water in de maatcilinder en voeg dit toe aan de steriele fles.
Weeg 1 g van het grondmonster af en voeg dit toe aan de fles met gedestilleerd water.Sluit de fles stevig af en schud deze om de oplossing grondig te mengen.
Label de steriele reageerbuizen "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" en "10 ^ -6". Voeg 9 ml gedestilleerd water toe aan elk van de buizen, met behulp van een van de pipetten.
Breng 1 ml van de oplossing in de fles over in de buis met het label "10 ^ -3" met een nieuwe pipet. Sluit de buis en draai deze voorzichtig rond totdat de oplossing goed gemengd is.
Breng 1 ml van de oplossing in de reageerbuis "10 ^ -3" over in de buis "10 ^ -4" met een nieuwe pipet. Sluit de buis "10 ^ -4" af en wervel om te mengen. Herhaal deze methode om de oplossing over te brengen van de buis "10 ^ -4" naar de buis "10 ^ -5" en vervolgens van de buis "10 ^ -5" naar de buis "10 ^ -6".
Plaat drie monsters elk uit de "10 ^ -4", "10 ^ -5" en "10 ^ -6" buizen. Gebruik een nieuwe pipet om 1 ml oplossing uit de buis in een petrischaal over te brengen. Voeg ongeveer 15 ml voedingsagar aan de plaat toe; plaats dan het deksel op de plaat en wervel zachtjes zodat de agar de bodem van de plaat bedekt.
Maak een controleplaat door 1 ml gedestilleerd water in een petrischaal te doen met behulp van een nieuwe pipet. Agar toevoegen; doe het deksel erop en draai de plaat rond.
Laat de petrischalen rechtop staan totdat de agar is uitgehard. Keer vervolgens de platen om en incubeer ze - in een incubator of bij kamertemperatuur - voor slechts 24 uur en maximaal vijf dagen.
Verwijder de platen uit de incubator na de gewenste hoeveelheid incubatietijd. Tel de bacteriekolonies op platen die ongeveer 30 tot 300 kolonies bevatten. Gebruik een permanente marker om de kolonies te markeren die u al hebt geteld om te voorkomen dat u dezelfde kolonies tweemaal moet tellen.
Deel het aantal kolonies geteld door de verdunning - "10 ^ -4," "10 ^ -5" of "10 ^ -6" - van de grondoplossing voor elke plaat. Zoek het aantal te cultiveren bacteriën in de oorspronkelijke gram grond door het gemiddelde te nemen van de resultaten van elke telbare plaat.